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    细胞凝集反应

    发布时间: 2015-08-27

     

    实验原理

     

     细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构,蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子,糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被(又称为糖萼)。许多研究结果表明:细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被(分枝状寡糖链)有关。

            凝集素(lectin)是一类含糖的(少数凝集素例外)并能与糖进行专一性结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素促使细胞凝集主要是由于它能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。

     

    实验试剂

     

    1. PBS缓冲液:称取NaCl 7.2g、Na2HP04 1.48g、KH2P04 0.43g、加蒸馏水,定容至l000 mL中,调pH值到7.2。

    2. 1%肝素溶液:称取肝素钠0.1g,定容至l0 mL生理盐水中即可。

     

    实验设备

     

     显微镜、托盘天平、载玻片若干、5mL注射器、滴管2支、离心管2支。

     

    实验材料

     

     1. 土豆块茎。

     2. 2% 红细胞悬液 

            以无菌方法抽取兔子耳缘静脉血液(5mL注射器用1%肝素溶液浸润)1mL,用生理盐水洗5次,每次3000 r/min,离心5 min,最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。

     

    实验步骤

     

    1. 称取土豆去皮块茎2g,切成小块
    2. 加10 mL PBS缓冲液,浸泡2h(浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素)
    3. 载玻片上滴一滴土豆凝集素 
    4. 再滴一滴2%红细胞液,充分混匀 
    5. 静置20 min 
    6. 低倍显微镜下观察血球凝集现象 
    7. 以PBS液加2%血细胞悬液作为对照实验,低倍显微镜下观察。

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